بررسی پروتئین شوک حرارتی a (hspa) helicobacter pylori به منظور تولید پروتئین نوترکیب برای اهداف ایمونولوژیک

lactococcus lactis یک باکتری پروبیوتیک بی خطر است که پتانسیل بالایی برای کلونینگ آنتی ژن های مختلف از جمله پروتئین های h. pylori را داراست. در بین آنتی ژن های مختلف برای تولید واکسن علیه عفونت h. pylori ، پروتئین شوک حرارتی a (hspa) یکی از کاندیداهای ارزشمند است که به وسیله همه سویه های h. pylori بیان می شود و زمانی که به صورت خوراکی به موش تلقیح می شود، واکنش های نامساعد را ایجاد نمی کند. هدف از پژوهش حاضر ساخت و آزمایش یک شاتل وکتور برای کلونینگ ژن hspa h. pylori به منظور بیان در میزبان lactococcus lactis با استفاده از سیستم القایی nice می باشد. توالی ژن hspa ( برپایه توالی باکتری h. pylori 26695 ) حاوی ترادف های بهینه شده و his-tag ساخته شد وآنالیزهای مختلف بیوانفورماتیکی پس از بهینه سازی بر روی آن صورت گرفت. این قطعه به داخل شاتل وکتور e. coli-l. lactis ، pnz8148 اضافه شد و سپس به باکتری e. coli mc1061 انتقال یافت. ترنسفورمانت ها پس از تعیین هویت و تخلیص پلاسمید نوترکیب با استفاده از الکتروپوریشن واردl. lactis nz9000 گردیدند. بیان hspa به وسیله نایسین القا شد و پروتئین به وسیله sds-page آنالیز گردید همچنین شرایط برای بیان پروتئین نوترکیب مورد نظر بهینه سازی شد. نتایج آنالیزهای بیوانفورماتیکی مبین عدم تأثیر گذاری بهینه سازی کدونی و افزودن دنباله هیستیدینی بر جایگاه فعال و ساختار سه بعدی پروتئین بهینه شده بود. همچنین بررسی های آنتی ژنیسیته نشان دهنده حضور اپی توپ سطحی با قابلیت شناسایی توسط mhc-iiدر پروتئین بهینه شده بود. برش آنزیمی، pcr و تعیین توالی محصول کلونینگ، حضور ژن hspa را در شاتل وکتور pnz8148 و در باکتری ترنسفورم شده l. lactis nz9000 تأیید کرد. نتایج sds-page نشان داد که پروتئینhspa به وسیله l. lactis nz9000 بیان گردیده است و همچنین میزان بیان نقش نایسین را به عنوان یک القاگر تأیید نمود. از آنجایی که l. lactis علاوه بر ویـژگی های پروبیوتیـکی بیان کننده پروتئین نسبت به e. coli مزیت دارد و نیز واجد سیستم کنترل کننده میزان بیان است بنابراین می تواند کاندیدای امید بخشی برای ساخت واکسن خوراکی علیه h. pylori باشد. انتقال موفقیت آمیز ژن hspa بهینه شده یh. pylori در l. lactis nz9000 از طریق ساخت شاتل وکتور و بیان آن به وسیله سیستم nice دارای اهمیت است.